LN229人(Ren)大(Da)脑(Nao)神(Shen)经(Jing)母(Mu)瘤(Liu)细(Xi)胞(Bao)细(Xi)胞(Bao)系(Xi)

别(Bie)称(Cheng) LN 229; LN229; LNT-229

种(Zhong)属(Shu) 人(Ren)类(Lei)

年(Nian)龄(Ling)（(?)性(Xing)别(Bie)）(?) 女(Nu)性(Xing)，(?)60岁(Sui)

组(Zu)织(Zhi)来(Lai)源(Yuan) 大(Da)脑(Nao)/右(You)额(E)叶(Ye)顶(Ding)枕(Zhen)叶(Ye)皮(Pi)质(Zhi)

生(Sheng)长(Chang)特(Te)性(Xing) 贴(Tie)壁(Bi)细(Xi)胞(Bao)

细(Xi)胞(Bao)形(Xing)态(Tai) 上(Shang)皮(Pi)细(Xi)胞(Bao)样(Yang)

1. 收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)后(Hou)首(Shou)先(Xian)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)瓶(Ping)是(Shi)否(Fou)完(Wan)好(Hao)，(?)培(Pei)养(Yang)液(Ye)是(Shi)否(Fou)有(You)漏(Lou)液(Ye)、(?)浑(Hun)浊(Zhuo)等(Deng)现(Xian)象(Xiang)，(?)干(Gan)冰(Bing)运(Yun)输(Shu)的(De)细(Xi)胞(Bao)检(Jian)查(Cha)干(Gan)冰(Bing)是(Shi)否(Fou)*挥(Hui)发(Fa)，(?)细(Xi)胞(Bao)是(Shi)否(Fou)解(Jie)冻(Dong)，(?)若(Ruo)有(You)上(Shang)述(Shu)现(Xian)象(Xiang)发(Fa)生(Sheng)请(Qing)及(Ji)时(Shi)和(He)我(Wo)们(Men)联(Lian)系(Xi)。(?)

2. 仔(Zi)细(Xi)阅(Yue)读(Du)细(Xi)胞(Bao)说(Shuo)明(Ming)书(Shu)，(?)了(Liao)解(Jie)细(Xi)胞(Bao)相(Xiang)关(Guan)信(Xin)息(Xi)，(?)如(Ru)细(Xi)胞(Bao)形(Xing)态(Tai)、(?)所(Suo)用(Yong)培(Pei)养(Yang)基(Ji)、(?)血(Xue)清(Qing)比(Bi)例(Li)、(?)所(Suo)需(Xu)细(Xi)胞(Bao)因(Yin)子(Zi)等(Deng)，(?)确(Que)保(Bao)细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)条(Tiao)件(Jian)一(Yi)致(Zhi)，(?)若(Ruo)由(You)于(Yu)培(Pei)养(Yang)条(Tiao)件(Jian)不(Bu)一(Yi)致(Zhi)而(?)导(Dao)致(Zhi)细(Xi)胞(Bao)出(Chu)现(Xian)问(Wen)题(Ti)，(?)责(Ze)任(Ren)由(You)客(Ke)户(Hu)自(Zi)行(Xing)承(Cheng)担(Dan)。(?)

3. 用(Yong)75%酒(Jiu)精(Jing)擦(Ca)拭(Shi)细(Xi)胞(Bao)瓶(Ping)表(Biao)面(Mian)，(?)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)。(?)因(Yin)运(Yun)输(Shu)问(Wen)题(Ti)，(?)部(Bu)分(Fen)细(Xi)胞(Bao)由(You)于(Yu)温(Wen)度(Du)变(Bian)化(Hua)及(Ji)剧(Ju)烈(Lie)碰(Peng)亡(Wang)破(Po)碎(Sui)形(Xing)成(Cheng)碎(Sui)片(Pian)，(?)是(Shi)正(Zheng)常(Chang)现(Xian)象(Xiang)。(?).观(Guan)察(Cha)好(Hao)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)后(Hou)，(?)75%酒(Jiu)精(Jing)消(Xiao)毒(Du)瓶(Ping)壁(Bi)将(Jiang)T25瓶(Ping)置(Zhi)于(Yu)37℃(?)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)放(Fang)置(Zhi)2-4h。(?)

4. 贴(Tie)壁(Bi)细(Xi)胞(Bao)可(Ke)以(Yi)消(Xiao)化(Hua)，(?)悬(Xuan)浮(Fu)细(Xi)胞(Bao)直(Zhi)接(Jie)混(Hun)匀(Yun)收(Shou)集(Ji)细(Xi)胞(Bao)，(?)900 rpm-1000 rpm离(Li)心(Xin)3 min，(?)弃(Qi)上(Shang)清(Qing)。(?)加(Jia)5 mL PBS重(Zhong)悬(Xuan)细(Xi)胞(Bao)，(?)再(Zai)900 rpm-1000 rpm离(Li)心(Xin)3 min，(?)，(?)用(Yong)新(Xin)鲜(Xian)的(De)*培(Pei)养(Yang)基(Ji)重(Zhong)悬(Xuan)细(Xi)胞(Bao)，(?)并(Bing)接(Jie)种(Zhong)到(Dao)新(Xin)的(De)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)或(Huo)培(Pei)养(Yang)皿(Min)中(Zhong)，(?)置(Zhi)于(Yu)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)中(Zhong)进(Jin)行(Xing)培(Pei)养(Yang)。(?)

5. 请(Qing)客(Ke)户(Hu)用(Yong)相(Xiang)同(Tong)条(Tiao)件(Jian)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)用(Yong)于(Yu)细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)。(?)

6. 建(Jian)议(Yi)客(Ke)户(Hu)收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)后(Hou)前(Qian)3天(Tian)各(Ge)拍(Pai)几(Ji)张(Zhang)细(Xi)胞(Bao)照(Zhao)片(Pian)，(?)记(Ji)录(Lu)细(Xi)胞(Bao)状(Zhuang)态(Tai)，(?)便(Bian)于(Yu)和(He)我(Wo)司(Si)技(Ji)术(Shu)部(Bu)沟(Gou)通(Tong)交(Jiao)流(Liu)。(?)由(You)于(Yu)运(Yun)输(Shu)的(De)原(Yuan)因(Yin)，(?)个(Ge)别(Bie)敏(Min)感(Gan)细(Xi)胞(Bao)会(Hui)出(Chu)现(Xian)不(Bu)稳(Wen)定(Ding)的(De)情(Qing)况(Kuang)，(?)请(Qing)及(Ji)时(Shi)和(He)我(Wo)们(Men)联(Lian)系(Xi)，(?)告(Gao)知(Zhi)细(Xi)胞(Bao)的(De)具(Ju)体(Ti)情(Qing)况(Kuang)，(?)以(Yi)便(Bian)我(Wo)们(Men)的(De)技(Ji)术(Shu)人(Ren)员(Yuan)跟(Gen)踪(Zong)回(Hui)访(Fang)直(Zhi)至(Zhi)问(Wen)题(Ti)解(Jie)决(Jue)。(?)

7. 该(Gai)细(Xi)胞(Bao)仅(Jin)供(Gong)科(Ke)研(Yan)使(Shi)用(Yong)。(?)

8. 备(Bei)注(Zhu)：(?)运(Yun)输(Shu)用(Yong)的(De)培(Pei)养(Yang)基(Ji)(灌(Guan)液(Ye)培(Pei)养(Yang)基(Ji))不(Bu)能(Neng)再(Zai)用(Yong)来(Lai)培(Pei)养(Yang)细(Xi)胞(Bao)，(?)请(Qing)换(Huan)用(Yong)按(An)照(Zhao)说(Shuo)明(Ming)书(Shu)细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)条(Tiao)件(Jian)新(Xin)配(Pei)制(Zhi)的(De)*培(Pei)养(Yang)基(Ji)来(Lai)培(Pei)养(Yang)细(Xi)胞(Bao)。(?) 收(Shou)到(Dao)细(Xi)胞(Bao)后(Hou)次(Ci)传(Chuan)代(Dai)建(Jian)议(Yi)1：(?)2传(Chuan)代(Dai) 。(?)

9. 注(Zhu)意(Yi)：(?) 1:2传(Chuan)代(Dai)就(Jiu)是(Shi)1个(Ge)T25瓶(Ping)传(Chuan)2个(Ge)T25瓶(Ping)或(Huo)者(Zhe)2个(Ge)6cm皿(Min)。(?)不(Bu)是(Shi)1个(Ge)T25瓶(Ping)传(Chuan)2个(Ge)10cm皿(Min)。(?)

1)复(Fu)苏(Su)细(Xi)胞(Bao)：(?)将(Jiang)含(Han)有(You)1 mL细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)的(De)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)在(Zai) 37℃(?)水(Shui)浴(Yu)中(Zhong)迅(Xun)速(Su)摇(Yao)晃(Huang)解(Jie)冻(Dong)，(?)加(Jia)4 mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)混(Hun)合(He)均(Jun)匀(Yun)。(?)在(Zai)1000 rpm条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)3 min，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)加(Jia)1-2 mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)后(Hou)吹(Chui)匀(Yun)。(?)然(Ran)后(Hou)将(Jiang)所(Suo)有(You)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)含(Han)适(Shi)量(Liang)培(Pei)养(Yang)基(Ji)的(De)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)培(Pei)养(Yang)过(Guo)夜(Ye)(或(Huo)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)加(Jia)入(Ru)10 cm皿(Min)中(Zhong)，(?)加(Jia)入(Ru)约(Yue)8 mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)，(?)培(Pei)养(Yang)过(Guo)夜(Ye))。(?)第(Di)二(?)天(Tian)换(Huan)液(Ye)并(Bing)检(Jian)查(Cha)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)。(?)

2)细(Xi)胞(Bao)传(Chuan)代(Dai)：(?)如(Ru)果(Guo)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)达(Da)80%-90%，(?)即(Ji)可(Ke)进(Jin)行(Xing)传(Chuan)代(Dai)培(Pei)养(Yang)。(?)

a、(?)弃(Qi)去(Qu)培(Pei)养(Yang)上(Shang)清(Qing)，(?)用(Yong)不(Bu)含(Han)钙(Gai)、(?)镁(Mei)离(Li)子(Zi)的(De)PBS润(Run)洗(Xi)细(Xi)胞(Bao)1-2次(Ci)。(?)

b、(?)加(Jia)1 mL消(Xiao)化(Hua)液(Ye)(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于(Yu)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)中(Zhong)，(?)使(Shi)消(Xiao)化(Hua)液(Ye)浸(Jin)润(Run)所(Suo)有(You)细(Xi)胞(Bao)，(?)将(Jiang)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)置(Zhi)于(Yu)37℃(?)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)中(Zhong)消(Xiao)化(Hua)1-2 min(视(Shi)细(Xi)胞(Bao)情(Qing)况(Kuang)而(?)定(Ding))，(?)然(Ran)后(Hou)在(Zai)显(Xian)微(Wei)镜(Jing)下(Xia)观(Guan)察(Cha)细(Xi)胞(Bao)消(Xiao)化(Hua)情(Qing)况(Kuang)，(?)若(Ruo)细(Xi)胞(Bao)大(Da)部(Bu)分(Fen)变(Bian)圆(Yuan)并(Bing)脱(Tuo)落(Luo)，(?)迅(Xun)速(Su)拿(Na)回(Hui)操(Cao)作(Zuo)台(Tai)，(?)轻(Qing)敲(Qiao)几(Ji)下(Xia)培(Pei)养(Yang)瓶(Ping)后(Hou)加(Jia)2-3ml*培(Pei)养(Yang)基(Ji)终(Zhong)止(Zhi)消(Xiao)化(Hua)。(?)轻(Qing)轻(Qing)打(Da)匀(Yun)后(Hou)装(Zhuang)入(Ru)无(Wu)菌(Jun)离(Li)心(Xin)管(Guan)中(Zhong)，(?)1000 rpm离(Li)心(Xin)5 min，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)补(Bu)加(Jia)1-2 mL培(Pei)养(Yang)液(Ye)后(Hou)吹(Chui)匀(Yun)。(?)

c、(?)将(Jiang)细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)按(An)1:2比(Bi)例(Li)分(Fen)到(Dao)新(Xin)的(De)含(Han)8 mL培(Pei)养(Yang)基(Ji)的(De)新(Xin)皿(Min)中(Zhong)或(Huo)者(Zhe)瓶(Ping)中(Zhong)，(?)置(Zhi)于(Yu)培(Pei)养(Yang)箱(Xiang)中(Zhong)培(Pei)养(Yang)。(?)

3)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)：(?)待(Dai)细(Xi)胞(Bao)生(Sheng)长(Chang)状(Zhuang)态(Tai)良(Liang)好(Hao)时(Shi)，(?)可(Ke)进(Jin)行(Xing)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)。(?)下(Xia)面(Mian) T25 瓶(Ping)为(Wei)例(Li);

a、(?)收(Shou)集(Ji)细(Xi)胞(Bao)及(Ji)细(Xi)胞(Bao)培(Pei)养(Yang)液(Ye)，(?)装(Zhuang)入(Ru)无(Wu)菌(Jun)离(Li)心(Xin)管(Guan)中(Zhong)，(?)1000 rpm条(Tiao)件(Jian)下(Xia)离(Li)心(Xin)4 min，(?)弃(Qi)去(Qu)上(Shang)清(Qing)液(Ye)，(?)用(Yong)PBS清(Qing)洗(Xi)一(Yi)遍(Bian)，(?)弃(Qi)尽(Jin)PBS，(?)进(Jin)行(Xing)细(Xi)胞(Bao)计(Ji)数(Shu)。(?)

b、(?)根(Gen)据(Ju)细(Xi)胞(Bao)数(Shu)量(Liang)加(Jia)入(Ru)无(Wu)血(Xue)清(Qing)细(Xi)胞(Bao)冻(Dong)存(Cun)液(Ye)，(?)使(Shi)细(Xi)胞(Bao)密(Mi)度(Du)5×(?)106~1×(?)107/mL，(?)轻(Qing)轻(Qing)混(Hun)匀(Yun)，(?)每(Mei)支(Zhi)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)冻(Dong)存(Cun)1mL细(Xi)胞(Bao)悬(Xuan)液(Ye)，(?)注(Zhu)意(Yi)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)做(Zuo)好(Hao)标(Biao)识(Shi)。(?)

c、(?)将(Jiang)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)放(Fang)入(Ru)-80℃(?)冰(Bing)箱(Xiang)，(?)24 h后(Hou)转(Zhuan)入(Ru)液(Ye)氮(Dan)灌(Guan)储(Chu)存(Cun)。(?)记(Ji)录(Lu)冻(Dong)存(Cun)管(Guan)位(Wei)置(Zhi)以(Yi)便(Bian)下(Xia)次(Ci)拿(Na)取(Qu)。(?)